描述:Pfu DNA,代理,上海代理,北京代理,,總代理,國內(nèi)代理
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· Pfu DNA 聚合酶內(nèi)容 (250 U)
Pfu DNA聚合酶(5 U/μl) | 50 μl |
dNTP 混合液 (各10 mM) | 250 μl |
10 × Pfu Buffer with Mg2+ | 1 ml |
· 聚合酶說明
本酶為Pyrococcus furiosus中分離的pfu DNA pol 基因在大腸桿菌中進行表達后經(jīng)多次純化分離而得。聚合酶具有3’-5’外切酶(校正)活性,當聚合反應發(fā)生堿基錯配時,聚合酶的校正活性可將錯配的堿基切除。聚合酶為使用范圍zui廣的高保真DNA聚合酶,其錯誤率僅為1.3x10-6,推薦聚合酶用于需高保真的PCR反應。
· 聚合酶用途
用于要求保真度比較高的PCR反應,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成等(參見 Sinobio 實驗方案)。
· 聚合酶產(chǎn)品特點
高保真:聚合酶是使用zui廣泛的高保真酶,其保真度為普通Taq酶的10倍。
靈敏:可從0.05ng人基因組DNA模板中擴增出特定基因片段(圖例一)。
快捷:PCR反應所必需試劑全集于一管之中,數(shù)分鐘即可完成反應體系配置。
便利:10μl, 25μl 或50μl體系全部適用。
· 質(zhì)量保證
經(jīng)多次柱純化,SDS-PAGE檢測純度大于95%;
PCR方法檢測無大腸桿菌DNA殘留,無核酸內(nèi)、外切酶污染。
· 聚合酶使用建議
聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平滑末端,無3’端"A"突出,其PCR產(chǎn)物的克隆有兩種方案。
1. PCR前引物進行5’端加磷修飾或?qū)CR產(chǎn)物磷酸化處理后再直接克隆于平滑末端的載體中(參見 Sinobio實驗方案)。
2. 將產(chǎn)物3’末端加A后再與T-Vector連接(參見 Sinobio 實驗方案)。
3. 由于聚合酶的校對活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設計引物時應適當增加引物的長度,理想的引物長度為20-30堿基。另外為了減少由3′-5′外切酶活性引起的引物降解,盡量在冰上配置反應體系,并zui后加入Pfu酶。
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