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DNA殘留檢測(cè)試劑盒

描述:對(duì)所使用的疫苗,我們Z關(guān)心的是疫苗的效果和其安全性。

更新時(shí)間:2016-12-10
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廠商性質(zhì):代理商
詳情介紹

 

疫苗DNA殘留對(duì)人體的潛在危害

對(duì)所使用的疫苗,我們zui關(guān)心的是疫苗的效果和其安全性。現(xiàn)在很多疫苗是細(xì)胞培養(yǎng)疫苗,比如重組(CHO細(xì)胞)乙肝疫苗,Vero細(xì)胞狂犬病疫苗等大多數(shù)疫苗都是用細(xì)胞培養(yǎng)的方法生產(chǎn),而對(duì)疫苗的純化是關(guān)鍵問(wèn)題,我們要盡可能的去除宿主細(xì)胞DNA和宿主蛋白。假若宿主細(xì)胞的DNA和蛋白同疫苗一起注入人體將會(huì)產(chǎn)生不可預(yù)料的后果。就以疫苗DNA殘留為例,疫苗DNA殘留可能造成插入突變﹑導(dǎo)致抑癌基因失活﹑癌基因被激活等,zui終造成疫苗使用者致癌。

 

疫苗DNA殘留的相關(guān)法規(guī)

由于有如此潛在的危險(xiǎn)性,所以許多機(jī)構(gòu)對(duì)疫苗DNA殘留制定了相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),1986年世界衛(wèi)生組織規(guī)定用細(xì)胞系生產(chǎn)的疫苗DNA殘留不能超過(guò)100 pg /支 ,而在1998年世界衛(wèi)生組織認(rèn)為細(xì)胞系生產(chǎn)的疫苗DNA殘留不能超過(guò)10 ng /支,而在1997年美國(guó)藥品食品衛(wèi)生監(jiān)督局規(guī)定在美國(guó)使用的細(xì)胞系疫苗DNA殘留不能超過(guò)10 pg /支,中國(guó)規(guī)定的細(xì)胞系疫苗DNA殘留不能超過(guò)100 pg /支。

所以在疫苗生產(chǎn)中要隨時(shí)對(duì)DNA殘留進(jìn)行檢測(cè),以便知道每個(gè)過(guò)程除掉DNA殘留的能力。在每一批產(chǎn)品中我們必須檢測(cè)DNA殘留,所以我們必須運(yùn)用敏感且行之有效的對(duì)DNA殘留定量的檢測(cè)方法。通常規(guī)定每支疫苗DNA殘留不能超過(guò)100 pg,也就大約等同于17個(gè)甚至更少CHO細(xì)胞基因組DNA的含量,對(duì)如此微量的DNA殘留進(jìn)行檢測(cè),所用的技術(shù)方法就必須相當(dāng)敏感和穩(wěn)定,現(xiàn)在對(duì)DNA殘留定量的方法主要有以下三種:
1、分子雜交技術(shù)檢測(cè)DNA殘留
2、基于DNA結(jié)合蛋白的方法(Threshold® immunoassay)檢測(cè)DNA殘留
3、實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)DNA殘留

 

分子雜交技術(shù)檢測(cè)DNA殘留的原理和方法

分子雜交分析的基本原理是基于DNA探針檢測(cè)變性而且固定在硝-酸纖維素膜上的宿主細(xì)胞DNA。這些探針可以不依賴(lài)宿主細(xì)胞DNA來(lái)制備,例如用隨機(jī)引物制備探針。探針上標(biāo)記酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛標(biāo)記核酸探針,操作方便、靈敏度高,已標(biāo)記的探針在4℃貯存可達(dá)兩年之久,方便隨時(shí)應(yīng)用,所以現(xiàn)在常采用地高辛標(biāo)記核酸探針,用光標(biāo)記法將光敏Dig標(biāo)記到探針上,制成光敏-Dig-核酸探針,再與固定在硝--酸膜上的靶核酸進(jìn)行靶DNA分子雜交,使之與抗Dig-堿性磷酸酶結(jié)合,zui后可用不同的檢測(cè)方式進(jìn)行檢測(cè),發(fā)光檢測(cè)和顯色檢測(cè)均可,靈敏度可達(dá)10pg以下(表 1  三種DNA殘留檢測(cè)方法的比較)。

 

基于DNA結(jié)合蛋白的方法(Threshold® Immunoassay)檢測(cè)DNA殘留的原理和方法

Threshold® Immunoassay分析系統(tǒng)是基于兩種DNA序列非特異性蛋白,單鏈DNA(ssDNA)結(jié)合蛋白(SSB)和抗ssDNA 的單抗。檢測(cè)的基本過(guò)程是當(dāng)生物素—DNA單鏈結(jié)合蛋白和尿素酶—抗ssDNA 的單抗與變性的宿主細(xì)胞DNA結(jié)合zui終形成復(fù)合物,通過(guò)親合素將此復(fù)合物連接到生物素—硝--酸纖維素膜,在通過(guò)洗滌所有非特異性的被洗脫掉,zui后放于有尿素溶液的讀數(shù)儀,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2 導(dǎo)致PH值發(fā)生變化,讀數(shù)儀根據(jù)PH值的變化換算成DNA的量,從而達(dá)到檢測(cè)DNA殘留含量的目的。

 

實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)DNA殘留的原理和方法

熒光定量PCR是基于PCR擴(kuò)增時(shí),在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,產(chǎn)物的增加可以通過(guò)熒光信號(hào)指示,通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)控PCR體系中的熒光信號(hào),對(duì)樣本中初始模板進(jìn)行定量分析。定量PCR可實(shí)時(shí)檢測(cè)產(chǎn)物量,通過(guò)加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后根據(jù)待測(cè)樣品在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的位置推算初始模板的濃度,從而達(dá)到檢測(cè)DNA殘留含量的目的。

 

三種檢測(cè)DNA殘留方法的比較

3種方法用來(lái)檢測(cè)疫苗DNA殘留都要對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)的處理,這對(duì)zui終的結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。而雜交相對(duì)對(duì)樣品DNA的損失小,而用Q-PCR需要提取樣品的DNA,損失較大。在我們選擇那種方法時(shí)我們要考慮它的穩(wěn)定性,敏感性,成本等以至找到*的性價(jià)比的方法(表 1),從表1 我們不難發(fā)現(xiàn)使用分子雜交的方法是一種比較可行經(jīng)濟(jì)實(shí)用的方法,目前國(guó)內(nèi)也主要是用此方法。

表 1  三種DNA殘留檢測(cè)方法的比較

 

Hybridization

Threshold® Immunoassay

Q-PCR

特異性

物種特異性

無(wú)特異性

序列特異性

檢測(cè)的zui小序列長(zhǎng)度(bp)

50

600

150

抗干擾性和穩(wěn)定性

++

+

+

所需時(shí)間(h)

48

6

2

敏感性(pg)

10

6

<1

初期花費(fèi)($)

1200

>40000

>70000

 

羅氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II試劑盒產(chǎn)品簡(jiǎn)介

產(chǎn)品中文名稱(chēng):高效DNA地高辛標(biāo)記和檢測(cè)試劑盒II

羅氏應(yīng)用科學(xué)部(Roche Applied Science)是zui早致力于向用戶提供非放射標(biāo)記技術(shù)的公司之一,讓更多的科研工作者們可以避免使用危險(xiǎn)的放射性同位素。DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II(第二代)是由羅氏公司研發(fā),并且是在DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I(*代)的基礎(chǔ)上優(yōu)化升級(jí)的,具有更高的準(zhǔn)確性、更好的靈敏度、操作時(shí)間更短等特點(diǎn)。自1995年地高辛產(chǎn)品上市以來(lái),盡管有定量PCR技術(shù)的應(yīng)用,DIG系統(tǒng)仍然是非放射性高效標(biāo)記—檢測(cè)技術(shù)的*,被廣泛地應(yīng)用各種膜雜交及原位雜交技術(shù)中。

 

高效DNA地高辛標(biāo)記和檢測(cè)試劑盒II 圖片

 

欲了解詳細(xì)信息請(qǐng)咨詢 

 

羅氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II檢測(cè)原理

該產(chǎn)品是用地高辛(地高辛:英文名Digoxigenin,簡(jiǎn)稱(chēng)DIG;又稱(chēng)異羥基洋地黃毒甙元,是一種類(lèi)固醇半抗原分子)標(biāo)記的DNA探針,應(yīng)用于分子雜交和隨后的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。檢測(cè)主要分三階段進(jìn)行:1. DNA標(biāo)記:根據(jù)隨機(jī)引物標(biāo)記技術(shù),生成DIG地高辛標(biāo)記的DNA探針。 2. 雜交:按照標(biāo)準(zhǔn)雜交方法進(jìn)行,將地高辛標(biāo)記的DNA探針用于核酸點(diǎn)雜交,可選擇帶正電的尼龍膜或純硝--酸纖維素膜作為雜交膜。 3. 免疫學(xué)檢測(cè):首先將標(biāo)記有AP的地高辛抗體與雜交探針免疫結(jié)合;然后在477 nm波長(zhǎng)下,通過(guò)檢測(cè)堿性磷酸酶與CSPD底物產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的數(shù)值,從而達(dá)到免疫檢測(cè)的目的。

 

羅氏Roche DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit II的顯著特點(diǎn)

★ Accurate and fast-----使用預(yù)混合的高效地高辛(DIG)標(biāo)記的隨機(jī)引物可以縮短標(biāo)記DNA探針的操作時(shí)間,提高標(biāo)記物的產(chǎn)量。 
★ Sensitive-----在人類(lèi)DNA的復(fù)合物和植物基因組中,可以檢測(cè)到單個(gè)拷貝的基因。 
★ Time-saving-----地高辛(DIG)標(biāo)記的探針可以儲(chǔ)存一年以上,雜交液可以反復(fù)使用3~5次(具體要根據(jù)每次雜交過(guò)程中標(biāo)記探針產(chǎn)生信號(hào)的強(qiáng)弱來(lái)確定)。

 

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           PVDF膜 
           硝--酸纖維素膜
           魚(yú)精DNA 
           蛋白酶K

 

 

11745832910

 

ProductQuantity Cat. No.
Qubit® 2.0 FluorometerEachQ32866
Qubit® Quantitation Starter KitEachQ32871
Qubit® Quantitation Lab Starter KitEachQ32872
Qubit® dsDNA BR Assay Kit100 assays, 2–1000 ng
500 assays, 2–1000 ng
Q32850
Q32853
Qubit® dsDNA HS Assay Kit100 assays, 0.2–100 ng
500 assays, 0.2–100 ng
Q32851
Q32854
Qubit® ssDNA Assay Kit100 assays, 1–200 ngQ10212
Qubit® RNA Assay Kit100 assays, 5–100 ng
500 assays, 5–100 ng
Q32852
Q32855
Qubit® RNA BR Assay Kit100 assays, 20–1000 ng
500 assays, 20–1000 ng
Q10210
Q10211
Qubit® Protein Assay Kit100 assays, 0.25–5 μg
500 assays, 0.25–5 μg
Q33211
Q33212
Qubit® Assay TubesSet of 500Q32856

 

 

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