无码aⅴ按摩免费中文字幕_国产精品合集一区二区三区_芭比视频app无限观看安卓_国产精品久久久久精品三级感谢你的关注_欧美成aⅴ人在线观看

歡迎進(jìn)入上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司!
產(chǎn)品展示
首頁 > 產(chǎn)品展示 > > 原核表達(dá)載體現(xiàn)貨供應(yīng) > 原核表達(dá)載體現(xiàn)貨供應(yīng)

原核表達(dá)載體現(xiàn)貨供應(yīng)

描述:啟動子是DNA鏈上一段能與RNA聚合酶結(jié)合并起始RNA合成的序列,它是基因表達(dá)*的重要調(diào)控序列。沒有啟動子,基因就不能轉(zhuǎn)錄。由于細(xì)菌RNA聚合酶不能識別真核基因的啟動子,因此原核表達(dá)載體所用的啟動子必須是原核啟動子。

更新時間:2016-12-06
訪問次數(shù):1606
廠商性質(zhì):代理商
詳情介紹

 原核表達(dá)載體指:能攜帶插入的外源核酸序列進(jìn)入原核細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制的載體。

 
  

 

 

編輯本段原核表達(dá)載體調(diào)控原件

1.啟動子

  啟動子是DNA鏈上一段能與RNA聚合酶結(jié)合并起始RNA合成的序列,它是基因表達(dá)*的重要調(diào)控序列。沒有啟動子,基因就不能轉(zhuǎn)錄。由于細(xì)菌RNA聚合酶不能識別真核基因的啟動子,因此原核表達(dá)載體所用的啟動子必須是原核啟動子。 原核啟動子是由兩段彼此分開且又高度保守的核苷酸序列組成,對mRNA的合成極為重要。在轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游5~10 bp處,有一段由6~8個堿基組成,富含A和T的區(qū)域,稱為Pribnow 盒,又名TATA 盒或-10區(qū)。來源不同的啟動子,Pribnow 盒的堿基順序稍有變化。在距轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游35 bp處,有一段由10 bp組成的區(qū)域,稱為-35區(qū)。轉(zhuǎn)錄時大腸桿菌RNA聚合酶識別并結(jié)合啟動子。-35區(qū)與RNA聚合酶s亞基結(jié)合,-10區(qū)與RNA聚合酶的核心酶結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)附近DNA被解旋形成單鏈,RNA聚合酶使*和第二核苷酸形成磷酸二酯鍵,以后在RNA聚合酶作用下向前推進(jìn),形成新生的RNA鏈。 原核表達(dá)系統(tǒng)中通常使用的可調(diào)控的啟動子有Lac(乳糖啟動子)、Trp(色氨酸啟動子)、Tac(乳糖和色氨酸的雜合啟動子) 、lPL (l噬菌體的左向啟動子)、T7噬菌體啟動子等。

2. SD序列

  1974年Shine和Dalgarno首先發(fā)現(xiàn),在mRNA上有核糖體的結(jié)合位點(diǎn),它們是起始密碼子AUG和一段位于AUG上游3~10 bp處的由3~9 bp組成的序列。這段序列富含嘌呤核苷酸,剛好與16S rRNA 3¢末端的富含嘧啶的序列互補(bǔ),是核糖體RNA的識別與結(jié)合位點(diǎn)。以后將此序列命名為Shine-Dalgarno序列,簡稱SD序列。它與起始密碼子AUG之間的距離是影響mRNA轉(zhuǎn)錄、翻譯成蛋白的重要因素之一,某些蛋白質(zhì)與SD序列結(jié)合也會影響mRNA與核糖體的結(jié)合,從而影響蛋白質(zhì)的翻譯。另外,真核基因的第二個密碼子必須緊接在ATG之后,才能產(chǎn)生一個完整的蛋白質(zhì)。

3.終止子

  在一個基因的3¢末端或是一個操縱子的3'末端往往有特定的核苷酸序列,且具有終止轉(zhuǎn)錄功能,這一序列稱之為轉(zhuǎn)錄終止子,簡稱終止子(terminator)。轉(zhuǎn)錄終止過程包括:RNA聚合酶停在DNA模板上不再前進(jìn),RNA的延伸也停止在終止信號上,完成轉(zhuǎn)錄的RNA從RNA聚合酶上釋放出來。對RNA聚合酶起強(qiáng)終止作用的終止子在結(jié)構(gòu)上有一些共同的特點(diǎn),即有一段富含A/T的區(qū)域和一段富含G/C的區(qū)域,G/C富含區(qū)域又具有回文對稱結(jié)構(gòu)。這段終止子轉(zhuǎn)錄后形成的RNA具有莖環(huán)結(jié)構(gòu),并且有與A/T富含區(qū)對應(yīng)的一串U。轉(zhuǎn)錄終止的機(jī)制較為復(fù)雜,并且結(jié)論尚不統(tǒng)一。但在構(gòu)建表達(dá)載體時,為了穩(wěn)定載體系統(tǒng),防止克隆的外源基因表達(dá)干擾載體的穩(wěn)定性,一般都在多克隆位點(diǎn)的下游插入一段很強(qiáng)的rrB核糖體RNA的轉(zhuǎn)錄終止子。

 

編輯本段原核表達(dá)載體構(gòu)建

1.獲得目的基因

 ?。?)通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

 

  (2)通過RT-PCR方法:提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA*鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

2.構(gòu)建重組表達(dá)載體

  (1)載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

 

 ?。?)PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

3. 獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

 ?。?) 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

 

 ?。?)測序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

 

 ?。?) 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

  

 

 
 

 

1. pET系列載體
1. pET系列載體
78-pet-5apET-5a2ug
78-pet11apET11a2ug
78-pet-11bpET-11b2ug
78-pet-11cpET-11c2ug
78-pet-15bpET-15b2ug
78-pet-16b(+)pET-16b(+)2ug
78-pet17bpET17b2ug
78-pet-19bpET-19b2ug
78-pet-20b(+)pET-20b(+)2ug
78-pet21a(+)pET21a(+)2ug
78-pet-21bpET-21b2ug
78-pet-21d(+)pET-21d(+)2ug
78-pet-22bpET-22b2ug
78-pet-23a(+)pET-23a(+)2ug
78-pet-24pET-242ug
78-pet24a(+)pET24a(+)2ug
78-pet24-bpET24-b2ug
78-pet-25b(+)pET-25b(+)2ug
78-pet26bpET26b2ug
78-pet27-bpET27-b2ug
78-pet-28apET-28a2ug
78-pet-28bpET-28b2ug
78-pet-28cpET-28c2ug
78-pet29apET29a2ug
78-pet-29bpET-29b2ug
78-pet-30apET-30a2ug
78-pet-30bpET-30b2ug
78-pet-30cpET-30c2ug
78-pet-32apET-32a2ug
78-pet32(+)cpET32(+)c2ug
78-pet-32bPET-32b2ug
78-pet35b(+)pET35b(+)2ug
78-pet38b(+)pET38b(+)2ug
78-pet-39bpET-39b2ug
78-pet-3apET-3a2ug
78-pet-40b(+)pET-40b(+)2ug
78-pet-41apET-41a2ug
78-pet-42a(+)pET-42a(+)2ug
78-pet-42bpET-42b2ug
78-pet-43apET-43a2ug
78-pet-43bpET-43b2ug
78-pet-49b(+)pET-49b(+)2ug
78-PET-31b(+)ET31b(+)2ug
78-pet-41b(+)pET-41b(+)2ug
78-pet41Ek-LicpET41Ek-Lic2ug
2. PTYB 系列載體2. PTYB 系列載體
78-TYB1TYB12ug
78-TYB2TYB22ug
78-TYB11TYB112ug
78-TYB12TYB122ug
3. pGEX系列載體3. pGEX系列載體
78-pGEX-4T-1pGEX-4T-12ug
78-pGEX-4T-2pGEX-4T-22ug
78-pGEX-6P-1pGEX-6P-12ug
78-pGEX-20TpGEX-20T2ug
78-pGEX-4T-3pGEX-4T-32ug
78-pGEX-6P-2pGEX-6P-22ug
78-pGEX-5X-1pGEX-5X-12ug
78-pGEX-2TKpGEX-2TK2ug
78-pGEXpGEX2ug
78-pGEX-KGpGEX-KG2ug
4. pBAD系列載體4. pBAD系列載體
78-pBAD24pBAD242ug
78-pBAD43pBAD432ug
78-pBADHis ApBADHis A2ug
78-pBADHisBpBADHisB2ug
78-pBADHisCpBADHisC2ug
5.原核融合表達(dá)載體5.原核融合表達(dá)載體
78-PProEX-HTapProEX-HTa2ug
78-PProEX-HTbpProEX-HTb2ug
78-PProEX-HTcpProEX-HTc2ug
78-PMAL-c4xpMAL-c4x2ug
78-PEYFP-mempEYFP-mem2ug
78-PEXP1-DESTpEXP1-DEST2ug
6. 其他載體
78-Pbv220pbv2202ug
78-PET-DsbApET-DsbA2ug
78-PET-GSTpET-GST2ug
78-PET-HispET-His2ug
78-KD3KD32ug
78-PLLP-Om78-PApLLP-OmpA2ug
78-PLLP-STIIpLLP-STII2ug
78-PMAL-C2XpMAL-C2X2ug
78-PMAL-P2XpMAL-P2X2ug
78-PMBP-PpMBP-P2ug
78-PQE30pQE302ug
78-PQE31pQE312ug
78-PQE-32pQE-322ug
78-PRSET CpRSET C2ug
78-PRSET-A/BpRSET-A/B2ug
78-PTH-304-18ZpTH-304-18Z2ug
78-PTrcHis BpTrcHis B2ug
78-PTrcHis CpTrcHis C2ug
78-PTrcHisApTrcHisA2ug
78-PTrxFuspTrxFus2ug
78-PTWIN1pTWIN12ug
78-PG-KJE8pG-KJE82ug
78-PGro7pGro72ug
78-PKJE7pKJE72ug
78-PG-Tf2pG-Tf22ug
78-PTf16pTf162ug
78-PQE40pQE402ug
78-PCMV-mycpCMV-myc2ug
78-PQE80pQE802ug
78-PSE380pSE3802ug
78-PQE-9pQE-92ug
78-PQE-60pQE-602ug
78-PQE-70pQE-702ug
78-PTWIN2pTWIN22ug
78-PCFS119PCFS1192ug
78-PVSV-GpVSV-G2ug
78-PCDFDuet-1pCDFDuet-12ug
78-PSecTag2 HygroApSecTag2 HygroA2ug

 

留言框

  • 產(chǎn)品:

  • 您的單位:

  • 您的姓名:

  • 聯(lián)系電話:

  • 常用郵箱:

  • 省份:

  • 詳細(xì)地址:

  • 補(bǔ)充說明:

  • 驗(yàn)證碼:

    請輸入計(jì)算結(jié)果(填寫阿拉伯?dāng)?shù)字),如:三加四=7